文章目录

1 材料和方法

1.1 试验材料

1.2 试验方法

    1.2.1 基因组DNA的提取

    1.2.2 目标引物的确定

    1.2.3 ISSR反应体系单因素优化

    1.2.4 ISSR-PCR反应体系正交优化

    1.2.5 ISSR-PCR正交反应体系优化结果评价

    1.2.6 ISSR-PCR反应体系正交优化结果验证

    1.2.7 引物筛选及退火温度的优化

2 结果与分析

2.1 DNA模板浓度优化结果

2.2 目标引物浓度优化结果

2.3 Master Mix体系用量优化结果

2.4 ISSR-PCR反应循环数优化结果

2.5 ISSR-PCR反应体系的正交优化

2.6 ISSR-PCR反应体系的验证

2.7 ISSR引物筛选及多态性分析

2.8 16个野生铁线莲的ISSR指纹图谱构建

3 讨论与结论

文章摘要:为进一步利用ISSR分子标记进行铁线莲遗传多样性分析、种质资源鉴定、遗传图谱构建等研究,本试验以卷萼铁线莲DNA为模板,采取L₉（3⁴）正交试验设计,对影响扩增反应的模板DNA含量、目标引物浓度、Master Mix、循环数4个主要因素进行优化,从而得出适宜于铁线莲的ISSR-PCR反应体系。并利用筛选出的12条多态性高的引物构建了16种野生铁线莲的指纹图谱。结果表明,在25μL反应体系中,各因素的最佳配比为模板DNA用量40 ng,引物浓度6μmol/L,Master Mix用量14μL,循环数40个。并且利用最优体系构建了16种野生铁线莲的遗传指纹图谱。该体系的建立为ISSR技术在铁线莲遗传多样性研究、遗传指纹图谱构建、分子标记辅助育种等研究提供了理论基础。指纹图谱的构建可以有效的对16种野生铁线莲进行区分和鉴定。

文章关键词:

论文DOI:10.13320/j.cnki.hjfor.2022.0010

论文分类号:S68

文章来源：《分子植物育种》 网址: http://www.fzzwyzzz.cn/qikandaodu/2022/0117/621.html